聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質具有不同等電點的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質（一種含有各種連續(xù)pI的小分子混合物）的電泳分離技術。載體兩性電解質是一系列多氨基多羧基的混合物，pI = 3～11。在制備聚丙烯酰胺凝膠時，將其混溶其中。

載體兩性電解質在溶液中的行為可從兩方面看。一方面，溶液的pH決定它帶電荷的性質。如溶液pH = 7時，對pI = 9的載體兩性電解質來說是處于酸性環(huán)境，故帶正電荷；但對pI = 3的載體兩性電解質來說是處于堿性環(huán)境，故帶負電荷。所以不同pI的載體兩性電解質在同一環(huán)境中帶有不同性質和數(shù)量的電荷。另一方面，溶液中的載體兩性電解質又破壞了水的解離平衡，使溶液pH有所改變。當某一載體兩性電解質pI較低，即釋放質子（H⁺）能力較強，使溶液pH值下降，這類兩性電解質稱為酸性載體兩性電解質。反之，pI高的可使溶液pH值上升，稱為堿性載體兩性電解質。

電泳時，凝膠板正極的電極液是磷酸，負極的電極液是氫氧化鈉。正極是酸性環(huán)境，載體兩性電解質都帶正電荷，但由于pI不同，其所帶正電荷數(shù)量有所差異，向負極泳動的速度不同。同理，負極是堿性環(huán)境，載體兩性電解質帶有數(shù)量不等的負電荷，以不同速度向正極泳動。根據(jù)載體兩性電解質的特性，在泳動過程中又不斷地與溶液交換質子，改變了溶液的pH。當達到平衡時，即得失質子相等，不再出現(xiàn)質子的交換時，載體兩性電解質到達等電點并各處于自己的pI區(qū)域，pI即是溶液的pH值。所以溶液呈現(xiàn)不同的pH，隨載體兩性電解質的pI梯度而形成pH梯度。

   

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